엘리사 버퍼 및 레시피

블로킹 버퍼는 비특이적 인 단백질, 코팅 단백질에 의해 점유되지 않은 판의 표면에 비특이적으로 결합하는 단백질 또는 화합물의 혼합물의 용액입니다.

블로킹 버퍼는 배경 및 신호 대 잡음비를 줄임으로써 ELISA 분석의 감도를 개선하면 효과적 일 수 있습니다.

이상적인 블로킹 버퍼는 모든 비특이적 사이트에 적용되므로 배경을 제거하여 항체 결합에 대한 분석 물질 에피토페를 가리지 않고 비특이적 신호를 줄입니다.

ELISA 코팅 버퍼는 마이크로 타이트 플레이트의 단백질/분석물 또는 항체를 고정시키는 데 사용됩니다. microtitre 플레이트에 대한 분석/항체를 고정시키는 주요 요인은 코팅 버퍼의 pH일 수 있습니다. pH 7.4와 pH 9.6 사이의 코팅 버퍼를 선택하면 단백질/항체/분석물 결합의 스테릭 구조에 영향을 미치고 고정화에 영향을 미칠 수 있습니다.

HRP (와사비 과산화 효소) 의 존재 하에서, TMB 및 과산화물은 반응하여 605 nm에서 최대 흡수력을 갖는 청색 바이패스를 생성한다. HRP 활성에 의해 생성되는 색 강도는 ELISA 분석의 분석물 수준에 비례합니다. (3,3',5,5' — 테트라메틸벤지딘) 인큐베이션 후 0.16M의 황산 정지 용액을 첨가하여 반응을 중단시킵니다.TMB 기판은 ELISA 플레이트의 각 우물에 첨가됩니다 (일반적으로 우물당 50 — 100UL). 색상이 파란색에서 노란색으로 변하여 색상 발달을 안정시키고 분광 광도계를 사용하여 450nm에서 정확한 강도를 측정할 수 있습니다.

PnPP는 알칼리성 인산 가수 분해 효소의 염색체 기질입니다. pnPP는 알칼리성 인산염 - 접합성 항체와 함께 사용하기위한 PnPP. 알칼리성 인산 가수 분해 효소는 PnPP의 가수 분해를 PnP로 촉매합니다. 그 결과 405nm에서 최대 흡수를 갖는 황색 페놀레이트가 생산됩니다. pnP는 빛에 민감하므로 보호되어야 합니다.

ELISA 세척의 목표는 신호 변경 파편을 제거하고 ELISA 구성 요소를 보존하는 것입니다. ELISA 플레이트는 검출 항체를 첨가하고 HRP 공액 항체를 첨가한 후 표준 및 시료를 첨가하기 전에 세척되며, 트리스 기반 및 PBS 기반 세척 버퍼를 ELISA 프로토콜에 사용할 수 있습니다.