ELISA 프로토콜에 필요한 대조 샘플

ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)는 항체와 색상 변화를 활용하여 물질을 식별하는 강력한 분석 생화학 분석입니다. 이는 샘플 내 항체 또는 항원의 존재를 검출하기 위해 면역학 분야에서 널리 사용됩니다. ELISA의 정확성과 신뢰성은 프로토콜 전반에 걸쳐 적절한 대조 샘플의 사용에 크게 좌우됩니다. 이 기사에서는 분석 결과의 유효성과 재현성을 보장하기 위해 ELISA에 필요한 필수 대조 샘플에 대해 자세히 설명합니다.

양성 및 음성 대조군

양성대조군
양성 대조군은 ELISA 프로토콜의 필수 구성 요소로, 분석이 의도한 대로 작동하는지 확인하는 벤치마크 역할을 합니다. 이 대조물질은 분석에 의해 확실하게 검출될 수 있는 농도의 표적 항원 또는 항체를 함유하는 것으로 알려진 시료로 구성됩니다. 양성 대조군의 양성 신호가 존재한다는 것은 ELISA 시약과 프로토콜이 적절하게 기능하고 있음을 나타냅니다. 이는 테스트 샘플을 비교할 수 있는 기준점을 제공합니다.
음성 대조군
반대로, 음성 대조군에는 표적 항원이나 항체가 전혀 포함되어 있지 않습니다. 이는 분석에서 비특이적 결합이나 배경 잡음을 식별하는 데 중요합니다. 음성 대조군은 실제 양성 결과와 배경 신호를 구별하는 데 도움이 되어 분석의 특이성을 보장합니다. 이 대조군은 일반적으로 표적 분석물질이 결여된 완충액 또는 혈청입니다.

표준

표준은 정량적 ELISA 분석에서 교정 곡선을 구성하는 데 사용되는 알려진 분석물의 농도입니다. 이를 통해 신호를 표준 곡선과 비교하여 테스트 샘플의 분석물 농도를 결정할 수 있습니다. 정량의 정확성을 보장하려면 표준품을 테스트 샘플과 동일한 방식으로 처리해야 합니다.

샘플 및 시약 블랭크

샘플 블랭크
종종 분석 공백이라고도 하는 샘플 공백에는 분석물을 제외한 분석의 모든 구성 요소가 포함되어 있습니다. 분광 광도계를 흡광도 0으로 조정하여 측정된 흡광도가 관심 분석물질에 의한 것인지 확인하는 데 사용됩니다. 샘플 블랭크는 분석의 다른 구성 요소에 의한 흡광도를 보정하는 데 도움이 됩니다.
시약 블랭크
시약 공백에는 1차 항체(간접 ELISA의 경우) 또는 항원(직접 ELISA의 경우)을 제외한 모든 시약이 포함됩니다. 이 컨트롤은 1차 항체-항원 상호작용을 제외하고 2차 항체와 분석 구성요소 사이의 비특이적 상호작용을 식별하는 데 필수적입니다.

스파이크 및 복구 및 희석 선형성 제어

스파이크 및 복구 제어
이 제어에는 알려진 양의 표적 분석물질을 테스트 샘플에 추가한 다음 ELISA를 수행하여 추가된 분석물질이 정확하게 회수될 수 있는지 평가하는 작업이 포함됩니다. 스파이크 및 복구 실험은 복잡한 샘플 매트릭스에서 분석의 정확성을 평가하는 데 도움이 됩니다.
희석의 선형성 제어
ELISA 결과가 다양한 시료 농도에 걸쳐 일관성이 있는지 확인하기 위해 희석 선형성 제어가 수행됩니다. 여기에는 표적 분석물질을 포함하는 것으로 알려진 샘플을 연속적으로 희석하고 측정된 농도를 예상 값과 비교하는 작업이 포함됩니다. 희석 전반에 걸친 일관성은 분석이 다양한 농도에서 분석물을 안정적으로 정량화할 수 있음을 나타냅니다.

결론

ELISA 프로토콜에 대조 샘플을 포함시키는 것은 분석 성능을 검증하고 결과의 정확성을 보장하는 데 중요합니다. 표준품, 시료 및 시약 블랭크, 스파이크 및 복구, 희석 선형성 컨트롤과 함께 양성 및 음성 컨트롤은 ELISA의 특이성, 민감도 및 재현성을 평가하는 데 필수적입니다. 연구자들은 이러한 컨트롤을 세심하게 통합함으로써 분석 결과를 자신 있게 해석할 수 있으며, 이는 면역학 연구 및 진단의 발전에 기여할 수 있습니다.

참고자료

Crowther, J.R., 2009. ELISA 가이드북. 휴마나프레스.
르퀸, R.M., 2005. 효소 면역분석(EIA)/효소 결합 면역흡착 분석(ELISA). 임상화학, 51(12), pp.2415-2418.
Hantash, J., Smidt, M., & Bowsher, R. R. (2009). 인간 혈청 내 Cetuximab 측정을 위한 ELISA 생체분석 방법의 개발, 최적화 및 검증. 분석 방법, 1(2), 144-148.
Hnasko, R., 2015. ELISA: 방법 및 프로토콜. 분자 생물학 방법, 1318.
Minic, R., & Zivkovic, I. (2020). ELISA의 최적화, 검증 및 표준화. 노로바이러스(pp. 9-28). 영국 런던: IntechOpen.
Engvall, E. 및 Perlmann, P., 1971. 면역글로불린의 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA) 정량 분석 ​​G. Immunochemistry, 8(9), pp.871-874.
17th Jul 2024 Sana Riaz

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