멀티플렉스 ELISA 키트
유세포측정법에 의한 다중분석 검출을 위한 사이토카인 비드 검정
GeniePlex는 비드 기반 멀티 플렉스 면역 검정법 기술입니다. 15μl 샘플에서 최대 24개의 분석물을 동시에 정량적으로 검출할 수 있습니다. GeniePlex 면역 측정법은 기존 유량계에서 수행 할 수 있습니다. 다른 값 비싼 도구를 구입할 필요가 없습니다.
- 유세포 측정법을 통해 최대 24개의 분석물 측정
- 15μL의 시료만 필요합니다.
- 인간, 쥐, 쥐, 송곳니 및 비인간 영장류용 사전 혼합 패널
- 나만의 사용자 정의 패널 만들기
사용자 정의 패널 사용 가능!
400개 이상의 분석물에서 선택할 수 있는 맞춤형 멀티플렉스 검정 결과를 만들어보세요!
Assay Genie는 20일 이내에 연구 요구 사항을 충족하는 맞춤형 검정 실험을 개발할 수 있습니다! 사용자 정의 패널 개발에 대한 자세한 내용을 보려면 여기를 클릭하여 연락하거나 아래 양식을 작성하십시오!
그림 1: GeniePlex 워크플로의 도식
- 자체 실험실 사용: 검정은 대부분의 검증된 유세포계 (PE 및 PE-cy5 또는 APC 검출기) 에서 실행할 수 있습니다.
- 무료 소프트웨어: FCAP 소프트웨어 v3.0과 같이 일반적으로 사용 가능한 소프트웨어로 분석합니다. 그렇지 않으면 데이터를 보내주십시오!
- 사용자 지정: 광범위한 목록에서 분석물을 찾을 수 없습니까? 경험 많은 과학자 팀에 귀하의 검정 결과 구축을 도와달라고 요청하십시오.
GeniePlex 멀티플렉스 ELISA란 무엇입니까?
여러 항 체 기반 검정 결과 플랫폼 ELISA 대안으로 개발 되었습니다 동시에 단일 샘플에서 분석물의 정량 검정, 일컬어 다중화 검정 실험. 다중 면역 검정법을 위한 가장 일반적인 플랫폼은 유동 기반 기술과 항체 코팅 비드를 사용합니다. 비드를 사용하여 단일 샘플에서 여러 분석물을 동시에 측정할 수 있습니다.
다중 검정에서 특정 분석물에 특정한 항체는 검정 결과 내의 비드 세트에 연결됩니다. 그런 다음 형광 리포터가 부착된 또 다른 항체가 추가됩니다. 각 비드 세트는 관련 색상을 가지므로 단일 시료에서 여러 분석물을 동시에 감지합니다. 분석물의 검출은 다양한 형광 서명으로 비드를 감지할 수 있기 때문에 유세포 측정기로 판독할 수 있습니다. 분석물의 양은 감지된 다양한 비드 색상의 수를 기준으로 정량화할 수 있습니다.
Genieplex 키트를 통해 연구자들은 유세포 측정법을 통해 15μL만큼 적게 사용하여 최대 24개의 애널리틱스를 다중화할 수 있습니다!
그림 2: 인간 18-플렉스의 표준 곡선
ELISA 지니 멀티플렉스 검정 원리
ELISA Genie의 GeniePlex 멀티플렉스 검정 기술은 크기와 다양한 수준의 형광 강도에 따라 차별화된 여러 비드 모집단을 사용합니다. GeniePlex 기술은 단일 반응으로 최대 24개의 검정물을 동시에 측정할 수 있습니다. GeniePlex 멀티플렉스 검정에는 15μL의 샘플이 필요합니다. 반응의 비드 개체군은 단일 488nm 레이저 또는 듀얼 488nm 및 633/640nm 레이저가 장착 된 유량 세포계에 의해 결정됩니다. 비드 분류 염료의 최대 배출량은 700nm입니다.
비드 기반 면역 검정법은 샌드위치 ELISA의 원리와 유사하며, 각 비드 모집단이 사이토카인과 같은 관심 있는 단백질을 샘플에 포획하는 특정 포획 항체와 결합되어 있습니다. 포착 된 분석물의 양은 단백질의 2 차 에피토프 (epitope) 에 대한 바이오티닐 화 항체를 통해 검출되고, 그 다음에 스트렙타비딘 R-피코 에리트린 치료가 시행됩니다. 비드에서 R-phycoerythrin의 형광 강도는 유세포계에서 정량화됩니다.
샘플에 관심 있는 단백질의 농도는 형광 신호와 분석물의 알려진 농도를 연속적으로 희석하여 생성된 표준 곡선의 신호와 비교하여 얻을 수 있습니다.
검정 절차는 60 분 항원 및 포획 항체 공액 비드 배양 단계, 30분 바이오티닐화 검출 배양 단계 및 20 분 StreptaVidInpe 배양 단계로 구성됩니다.
그림 3: 488nm 및 640nm 레이저가 모두 장착된 유량 세포계에서 분석된 24플렉스 cAb 비드
기능 및 이점
- 검정: 단일 샘플에서 2-24개의 분석물을 다중화!
- 빠른 속도: 2시간 프로토콜!
- 민감도: 각 분석물의 10pg/ml 미만의 낮음 측정
- 동적: 하한 < 20 pg/mL | 상한치> 5,000pg/mL
- 고정밀 인트라 검정 CV: < 10% | 검정간 CV: < 20%
- 낮은 부피: 15μl의 시료 사용
- 검증 완료: 실험실에서 교차 반응성을 완벽하게 테스트한 모든 검정
GeniePlex 또는 Luminex?
GeniePlex는 Luminex 기술에 비해 뛰어난 성능을 제공합니다. GeniePlex 인간 TH1/TH2/TH17 7-Plex 검정 결과 및 Luminex 다중 검정 결과 다양 한 시약으로 치료 하는 인간의 PBMC에서 세포 배양 상류제 샘플을 검정 하기 위해 사용 되었다.
그림 4: Luminex XMap 기술과 우수한 상관 관계를 보여주는 GeniePlex 멀티플렉스 면역검정법
GeniePlex vs ELISA
| GeniePlex | 엘리사 | |
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샘플 볼륨 |
15µL |
50-700µL |
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96 웰 플레이트 |
플레이트 1개 |
플레이트 7개 |
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시간 |
~4시간 |
~ 4-7시간 |
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검정 범위 |
2-5000pg/mL |
2-1500pg/mL |
그림 5: 종별 GeniePlex에서 사용할 수 있는분석물의 수
400개 이상의 분석물 결과를 측정할 수 있습니다!
- 종합적인 타겟 선택
- 인간, 쥐, 돼지, 개 및 영장류에 최대 400개의 검정 및 사용자 지정 형식 사용 가능
- 광범위한 시료 유형
- 세포 배양 상향제, 타액, 혈장, 세포/조직 용 해물, 혈청, BALF, 흉막 및 복막액 등
- 다양한 형식: 32 웰 및 96웰 크기 사용 가능
- 주요 사전 혼합 패널
- 사이토카인, 케모킨, 염증, Th1/Th2 및 Th1/Th2/Th17을 측정하기 위한 핵심 패널을 설계했습니다.
| 설명 | |||
휴먼 멀티플렉스 ELISA 패널 |
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마우스 멀티플렉스 ELISA 패널 |
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비 인간 영장류 ELISA 패널 |
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쥐 ELISA 패널 |
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개의 분석물 패널 |
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Multiplex ELISA Protocol Steps
| 단계 | 프로토콜 |
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1. |
필터 플레이트 템플릿을 준비합니다. 표준, 샘플 및 빈 웰을 표시하십시오. 표준 및 샘플은 중복 또는 3배로 실행해야 합니다. 전체 플레이트를 사용하지 않을 경우 사용하지 않은 웰을 플레이트 씰로 밀봉하십시오.
중요: 전체 검정 과정에서 필터 플레이트 뚜껑 위에 필터 플레이트를 놓아 모든 표면의 판 바닥에 닿지 않도록하십시오. |
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2. |
15초간 볼텍스 작동 비드 서스펜션이 작동합니다. |
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3. |
각 웰에 45µL의 캡처 비드 작동 서스펜션을 추가합니다. 참고: 나머지 캡처 비드 작업 서스펜션을 저장하고 가벼운 보호 기능을 사용하여 2-8°C에 보관하십시오. 유량계에서 획득 파라미터를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. |
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4. |
필터 플레이트 와셔 지침에 따라 조정된 진공 소스에 연결된 “플로우 스루”필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰의 버퍼를 제거합니다. |
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5. |
필터 플레이트 와셔 지침에 따라 조정된 진공 소스에 연결된 “플로우 스루”필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰의 버퍼를 제거합니다. |
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6. |
각 샘플 웰에 30µL의 CCS, SPB 또는 TL 검정 버퍼를 추가합니다. 참고: 사이토 카인의 매우 낮은 수준 (20 pg/mL 미만) 이 예상되는 경우 Assay Buffer에서 희석하지 않고 세포 배양 상향제 샘플을 실행할 수 있습니다. 이 경우 이 단계를 건너뛰고 7단계에서 각 샘플에 45µL의 세포 배양 상향제 샘플을 추가합니다. |
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7. |
각 시료 웰에 15µL의 시료를 추가합니다. 각 표준 웰에 45µL의 표준을 추가합니다. 플레이트를 플레이트 씰로 덮으십시오. |
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8. |
실온에서 60 분 동안 쉐이커 (700 rpm으로 설정) 에 배양하십시오. 필터 플레이트를 알루미늄 호일로 감싸서 빛으로부터 보호하십시오. |
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9. |
플레이트 씰을 제거합니다. 진공 공급원에 연결된 필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰의 용액을 제거합니다. |
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10. |
진공 공급원에 연결된 필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰의 용액을 제거합니다. |
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11. |
필터 플레이트 와셔를 사용하여 100µL 1x 워시 버퍼를 사용하여 웰을 세 번 씻으십시오. |
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12. |
플레이트 바닥을 여러 층의 종이 타월에 부드럽게 두드려 마지막 세척 후 플레이트 바닥의 잔류 완충액을 제거합니다. |
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13. |
각 웰에 25µL의 바이오티닐화 항체 작용 용액을 첨가하십시오. 플레이트를 플레이트 씰로 덮으십시오. |
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14. |
실온에서 30 분 동안 쉐이커 (700rpm으로 설정) 에 배양하십시오. 필터 플레이트를 알루미늄 호일로 감싸서 빛으로부터 보호하십시오. |
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15. |
플레이트 씰을 제거합니다. 필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰에서 용액을 제거합니다. 필터 플레이트 와셔를 사용하여 100 µL 1x 워시 버퍼를 사용하여 웰을 세 번 씻으십시오. |
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16. |
플레이트 바닥을 여러 층의 종이 타월에 부드럽게 두드려 마지막 세척 후 플레이트 바닥의 잔류 완충액을 제거합니다. |
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17. |
각 웰에 25µL의 스트렙타비딘 PE 작업 솔루션을 추가합니다. 플레이트를 플레이트 씰로 덮으십시오. |
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18. |
실온에서 20 분 동안 쉐이커 (700 rpm으로 설정) 에 배양하십시오. 필터 플레이트를 알루미늄 호일로 감싸서 빛으로부터 보호하십시오. |
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19. |
플레이트 씰을 제거합니다. 필터 플레이트 와셔를 사용하여 웰에서 용액을 제거합니다. 100 µL 1x 워시 버퍼로 웰을 두 번 씻으십시오. |
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20. |
플레이트 바닥을 여러 층의 종이 타월에 부드럽게 두드려 잔류 용액을 제거하십시오. 비드를 다시 일시 중단하기 위해 유량 세포계의 샘플 로딩 메커니즘에 따라 각 웰에 150µL의 1x 판독 버퍼 300µL를 추가합니다. 플레이트를 플레이트 씰로 덮으십시오. |
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21. |
플레이트를 마이크로타이터 쉐이커에 놓고 700rpm에서 30초 동안 흔들어줍니다. 참고: 유량계에 96 웰 플레이트 로더가 없고 비드를 다시 일시 중지하기 위해 200µL 이상의 1x 판독 버퍼가 필요한 경우 플레이트를 흔들지 마십시오. P200 파이펫으로 6-8 회 위아래로 파이펫팅하여 각 웰의 비드를 다시 일시 중지한 다음 획득을 위해 테스트 튜브로 옮깁니다. 플레이트 씰을 제거합니다. 유량 세포계에서 읽어보십시오. |
멀티플렉스 ELISA 문제 해결
| 문제 | 해결법 | ||||||||
낮은 레벨 수치 |
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낮은 검정 신호 또는 감도 |
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높은 배경 |
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낮은 정밀도 |
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막힌 필터 플레이트 |
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